保证分析数据的液相准确可靠
除了色谱柱填料粒度直径为亚2 pm外，高效还有采用的液相进样器与检测器与高效液相色谱的也有所不同。选择最高精度和最低扩散的色谱固定环进样器(SM-FL)或者选择高回收率、高精度、高效宽线性动态范围的液相流通针式进样器(SM—FTN)。双通道紫外检测器或二极管阵列检测器为高速检测器，色谱采样速率高，高效能准确积分快速流出的液相组分。
六、色谱高效液相色谱仪的高效日常维护
高效液相色谱仪需要日常精心的维护和保养，以便仪器处于正常的液相工作状态，延长仪器、色谱色谱柱的高效使用寿命，保证分析数据的液相准确可靠。
(一)高压泵的色谱日常维护
长色谱柱或使用了很长一段时间的色谱柱，或加大流动相的流速，柱压会明显提高，高压泵的噪声也会加大，这属于正常现象。高压泵的高压限制自动保护值不要设置太高，高效相色谱仪日常分析为20～30 MPa。当超压报警，高压泵停止泵液时，要逐级拆开管路，找出堵塞处排除后，再复位工作。每次超压都会对泵封带来影响，有可能会导致基线噪声加大。在维修高压泵时要特别小心，防止固体颗粒进入泵体，划伤密封垫、阀球、座和柱塞。防止折断柱塞杆。如果高压泵工作时，压力显示波动大于5%，通常提示需要停泵排气泡或清洗单向阀或应更换密封垫。
(二)对流动相的要求
所用的流动相和样品溶液必须经过0.45 μm或0.2μm的滤膜过滤才能上机使用。即使过滤后在分析柱前也要加装保护柱或过滤器。流动相所用的水必须新鲜，可以用超纯水制备仪或自行蒸馏，水质应符合《分析实验室用水国家标准》(GB／T 6682--2008)规定的实验室一级水规格。通常的做法是对电热蒸馏水再用全套玻璃蒸馏器重蒸馏一次。要注意用超声波清洗器定期在稀硝酸或甲醇中清洗过滤头，过滤头不通畅容易导致进入高压泵的流动相在管线中产生气泡。流动相在一定pH下操作时，要注意空气中CO2溶解在流动相内对pH变化的影响。更换流动相时，如果两种流动相互不相溶，需采用过渡溶剂(如异丙醇等)将前一种流动相逐步溶解彻底洗脱后才能换流动相。
(三)进样系统的维护
使用指定的进样器，防止进样器针头划伤阀体。在农药残留分析周期内，不要进行有干扰的常量分析。必要时要用乙腈、甲醇、水等反复清洗进样口。空走或进样溶剂确认进样口的洁净状态。
(四)色谱柱的日常维护
每次开机时，流量要逐渐增加或降低，避免突然增压或降压，使柱床受到冲击，产生空隙。不要接反柱头或其他连接拧得太紧，不漏液即可，如果拧得过紧易损坏接头螺纹。要注意使用的色谱柱pH范围，超出使用范围、超室温使用、样品净化差、超压冲击都会缩短色谱柱的使用寿命。在使用缓冲溶液作流动相时，更换乙腈或甲醇前，一定要用水将盐冲洗干净，否则盐沉积可能导致色谱柱彻底堵塞报废。高效液相色谱柱与气相色谱毛细管柱不同，保护再好也有一定的使用寿命。毛细管柱在防止干烧的情况下，可以有很长的寿命。液相色谱柱的寿命与流动相种类及处理、色谱仪操作的流量和压力、样品的净化处理有关。色谱柱是否报废，主要取决于对样品的分离度和在一定流量下的柱压。不要试图拧开色谱柱管，这样重新拧上会导致柱效显著下降，色谱柱提前报废。色谱柱经过反冲、清洗和再生往往很难使柱效恢复。色谱柱中的填料随温度升降产生膨胀和收缩，在某些情况下，温度突然变化会损坏柱床，因此使用时温度要逐渐升高，实验结束时色谱柱慢慢降到室温再停泵。每次实验结束后，反相色谱操作方式要用l00%乙腈或甲醇冲洗色谱柱20 min以上才能关机。拆卸后的色谱柱两端用盲头螺丝拧紧，防止封存的溶剂挥发。反相填料通常要用乙腈或甲醇，正相键合相用2，2，4-三甲基戊烷或按照色谱柱使用和维护指南要求封存保管。
(五)仪器组件连接和管路选择
使用的管路长度越短，内径越细，色谱峰形越窄。现在高效液相色谱普遍使用PEEK材料(最高耐压40 MPa)管路和接头，突出的优点是不需要动用扳手，用手拧紧就可以达到不漏液的效果，并且对有些化合物分析会获得满意色谱峰形。
(六)工作站的维护和升级
配备色谱工作站的液相色谱仪，通常由仪器生产厂商专门开发的软件操作系统来控制仪器的工作状态和数据处理。在安装和使用这类软件时要注意适用的计算机操作系统的版本和语言，对计算机的硬件设备要安装驱动软件，使之正常工作，否则可能导致计算机经常死机、乱码，影响正常的分析工作。要对原机器带来的软件进行拷贝或妥善存档。高效液相色谱仪工作站版本升级通常要付费。高效液相色谱仪的操作人员要具备计算机的知识并能熟练操作，能解决实际分析工作中遇到的问题。对于不具备这方面能力的人要进行培训，非工作人员不可随便启动计算机和液相色谱仪。为了和外界通信(网络连接或收发电子邮件等)，有的计算机必须安装使用双网卡。登录因特网后可能导致产生仪器主机无法与计算机工作站连接的问题。解决这个问题可以尝试有些杀病毒软件带的LSP修复工具。但有些实验室为了安全、管理的需要，可能不允许使用或安装双网卡。
七、高效液相色谱法的定性分析与定量分析
在定性分析方面，除采用与标准物质的相对保留时间比对外，还可以利用检测器的选择性、紫外检测器全波长扫描功能、改变流动相组成时农药的保留值变化规律进行定性分析。在农药残留分析上通常采用外标法进行定量分析，较少采用内标法。在农药原药和制剂定量分析上，当对分析准确度和精密度有较高要求时，可采用内标法分析。内标物通常选用农药残留标准中规定的内标物或邻苯二甲酸酯类同系物。除非是建立方法研究，日常依据标准的检测分析只采用单点校正或两个浓度标准溶液建标进行测定。
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